Szkolenie indywidualne w zakładzie Biochemii i Biologii Molekularnej prowadzimy z: „Podstaw biologii molekularnej” ( Temat I), oraz z „Podstaw działania hormonów tarczycy na poziomie molekularnym (szczególnie z poznania podstawowych metod stosowanych w badaniach ekspresji jodotyroninowych dejodynaz w tkankach ludzkich” (Temat II).

Temat I : Podstawy biologii molekularnej

Program:

Analiza DNA

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Transformacja bakterii plazmidowym DNA

ˇ Mini-hodowle płynne

ˇ Izolacja DNA z bakterii (miniprepy)

ˇ Mapa restrykcyjna, analiza restrykcyjna, elektroforeza

ˇ Izolacja DNA z żelu agarozowego

ˇ Wizualizacja wyników, interpretacja

Klonowanie

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Restrykcja, defosforylacja wektora, fosforylacja nieufosforylowanego DNA

ˇ Ligacja

PCR

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Projektowanie starterów

ˇ Zwykły PCR (namnażanie DNA z dużej ilosci czystego DNA), PCR z genomowego DNA,
RT-PCR

ˇ Interpretacja wyników

Analiza białek

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Produkcja białek rekombinowanych w lizacie retikulocytów króliczych

ˇ Izolacja białek całkowitych oraz białek jadrowych z fragmentów tkanek ludzkich

ˇ Przygotowanie żelu poliakryloamidowego, przygotowanie prób, elektroforeza, transfer, wybarwianie czerwienia Pounceau, immunoblot, wywoływanie metoda chemiluminescencyjna

ˇ Interpretacja wyników

Analiza RNA

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Izolacja RNA z hodowli komórkowych i tkanek

ˇ Żel denaturuj±cy, przygotowanie zdenaturowanego RNA, elektroforeza, transfer

ˇ Utrwalanie blotu, hybrydyzacja z sond±, płukanie, ekspozycja

ˇ Wywoływanie filmu i interpretacja wyników

Przygotowanie sond

ˇ Podstawy teoretyczne, informacje na temat zasad bezpiecznej pracy z izotopami

ˇ Sonda do blotów northern

ˇ Sonda do testów opóznienia migracji w żelu

Testy opóĽnienie migracji w żelu (interakcja DNA z białkami)

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Przygotowanie prób

ˇ Żel natywny, elektroforeza, suszenie, ekspozycja

ˇ Interpretacja wyników

Podstawy hodowli komórkowych

ˇ Zasady utrzymania czystosci w pokoju hodowlanym

ˇ Przygotowanie pożywek

ˇ Pasażowanie hodowli

ˇ Transfekcja

ˇ Przygotowanie komórek do analizy, odczyt w luminometrze

ˇ Interpretacja wyników

Szkolenie odbywa się w Zakładzie Biochemii i Biologii Molekularnej, w Centrum Medycznym Kształcenia Podyplomowego, Marymoncka 99/101, 01-813 Warszawa. Kierownik szkolenia: dr hab. Monika Puzianowska-KuĽnicka, tel 22 5693 813 (lub 810), e-mail anauman@cmkp.edu.pl

Zakres szkolenia i jego czas sa dopasowywane do indywidualnych potrzeb szkolonego!

Istnieje mozliwo¶ć wykonania własnych doswiadczeń na własnym materiale !

Temat II:

Plan indywidualnego szkolenia w zakresie podstaw działania hormonów tarczycy na poziomie molekularnym oraz znajomosci podstawowych metod stosowanych w badaniach ekspresji jodotyroninowych dejodynaz na poziomie molekularnym

Program:

Molekularny mechanizm działania hormonów tarczycy

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Regulacja syntezy hormonów tarczycy w gruczole tarczowym

ˇ Regulacja wydzielania hormonów na osi podwzgórze-przysadka-tarczyca - przez hormony tarczycy

ˇ Obwodowy metabolizm hormonów tarczycy

Analiza ekspresjii iodotyroninowych dejodynaz, specyficznosć tkankowa

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Oznaczanie aktywnosci jodotyroninowych dejodynaz metoda izotopowa ( ze znakowanym I¹²⁵ substratem)

ˇ Informacje na temat zasad bezpiecznej pracy z izotopami

ˇ Homogenizacja tkanek, izolacja białek oraz frakcji mikrosomalnej z fragmentów tkanek lub izolacja białek z hodowli komórkowej

ˇ Oznaczanie stężenia białka metoda spektrofotometryczn±

ˇ Oczyszczanie preparatów izotopowych na kolumnie Sephadex LH20,

ˇ Odzielanie uwolnionego znakowanego jodu od jodotyronin

ˇ Pomiar promieniowania gamma w liczniku

ˇ Interpretacja wyników

Oznaczanie dejodynaz na poziomie białka - metoda Western Blot ( jeżeli dostępne będa przeciwciała)

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Izolacja białek całkowitych z fragmentów tkanek ludzkich oraz z hodowli komórkowych

ˇ Przygotowanie żelu poliakryloamidowego, przygotowanie prób, elektroforeza, transfer, wybarwianie czerwienia Pounceau, immunoblot, wywoływanie metoda chemiluminescencyjna

ˇ Interpretacja wyników

PCR

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Projektowanie starterów

ˇ Zwykły PCR (namnażanie DNA z dużej ilosci czystego DNA), PCR z genomowego DNA, RT-PCR

ˇ Interpretacja wyników

Analiza dejodynaz na poziomie mRNA metoda northern blot

ˇ Podstawy teoretyczne

ˇ Izolacja RNA z badanych tkanek lub z hodowli komórkowych

ˇ Pomiar stężenia RNA w roztworze metoda spektrofotometryczna

ˇ Elektroforeza RNA na żelu agarozowym

ˇ Przygotowanie sond do blotów northern

ˇ Żel denaturuj±cy, przygotowanie zdenaturowanego RNA, elektroforeza, transfer

ˇ Utrwalanie blotu, hybrydyzacja z sond±, płukanie, ekspozycja

ˇ Wywoływanie filmu, densytometria, i interpretacja wyników

Podstawy hodowli komórkowych

ˇ Zasady utrzymania czystosci w pokoju hodowlanym

ˇ Przygotowanie pożywek

ˇ Pasażowanie hodowli

ˇ Krzywa wzrostu

ˇ Otrzymywanie lizatów komórkowych

Szkolenie odbywa się w Zakładzie Biochemii i Biologii Molekularnej, w Centrum Medycznym Kształcenia Podyplomowego, Marymoncka 99/101, 01-813 Warszawa.

Kierownik szkolenia: Prof dr hab. Alicja Macke-Nauman, tel 22 5693 813 (lub 810), e-mail anauman@cmkp.edu.pl

Zakres szkolenia i jego czas moga być dopasowywane do indywidualnych potrzeb szkolonego!