DYDAKTYKA



SZKOLENIA INDYWIDUALNE




Techniki molekularne w biologii i medycynie


1-741/0-59-011-2010



Kurs indywidualny doskonalący
kierownik naukowy kursu prof. dr hab. Alicja Macke-Nauman

Dzień Plan zajęc
Poniedziałek


1.Wprowadzenie
2.Przygotowanie do izolacji i analizy RNA (omówienie zasady izolacji, przygotowanie buforów).
3.Izolacja RNA metodą Chomczyńskiego z tkanek i hodowli komórkowych.
4.Elektroforeza RNA w żelu denaturującym. Wizualizacja żelu w bromku etydyny za pomocą promieniowania ultrafioletowego.
5.Reakcja odwrotnej transkrypcji na matrycy wyizolowanego RNA

Wtorek

1.Podstawy reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR): projektowanie starterów, ustalanie warunków reakcji, rodzaje stosowanych polimeraz DNA. Bazy danych sekwencji genów, oprogramowanie do analizy sekwencji. Różne zastosowania reakcji PCR.
2.Reakcja PCR na na matrycy cDNA uzyskanego poprzedniego dnia w reakcji odwrotnej transkrypcji, z wykorzystaniem starterów komplementarnych do sekwencji hostgenu HPRT.
3.Elektroforeza produktów PCR w żelu agarozowym. Wizualizacja wyników za pomocą bromku etydyny i promieniowania ultrafioletowego.
4.Klonowanie molekularne: Oczyszczanie produktu PCR. Synteza końcówek adeninowych. Ligacja.
5.Wprowadzenie do hodowli komórkowych. Zakładanie hodowli komórkowej.

Środa


1.Przygotowanie do izolacji ekstraktu jądrowego: omówienie zasad izolacji białek, przygotowanie buforów..
2.Izolacja ekstraktu białek jądrowych z wycinka tkanki nowotworowej.
3.Oznaczanie stężenia białka metodą spektrofotometryczną (aparat ND-1000).
4.Przygotowanie do elektroforezy białek SDS-PAGE: omówienie zasady rozdziału białek w polu elektrycznym, przygotowanie buforów, wylanie płytek.

Czwartek


1.Wprowadzenie do technik mikrobiologicznych. Zasady klonowania molekularnego.
2.Transformacja bakterii plazmidem. Hodowla bakterii w stałym.
3.Analiza restrykcyjna klonowanych konstruktów

Piątek


1.Elektroforeza białek jądrowych w żelu poliakrylamidowym w obecności SDS.
2.Transfer białek jądrowych z żelu na błonę nitrocelulozową.
1.PCR kolonijny. Elektroforeza produktów PCR.
2.Elektroforeza produktów analizy restrykcyjnej.
3.Minihodowle bakteryjne w podłożu płynnym.



Szkolenie odbywa się w Zakładzie Biochemii i Biologii Molekularnej,
w Centrum Medycznym Kształcenia Podyplomowego,
Marymoncka 99/101, 01-813 Warszawa.
Kierownik szkolenia: Prof dr hab. Alicja Macke-Nauman,
tel. 0-22 5693-813 lub 0-22 5693-810,
e-mail anauman@cmkp.edu.pl



Podstawy biologii molekularnej

1-741-59-019-2009
Kurs indywidualny doskonalący
kier.nauk.kursu. dr hab. Monika Puzianowska-Kuźnicka

TEMAT LICZBA GODZIN
Analiza RNA
1.Podstawy teoretyczne (zasady postępowania z RNA, omówienie alternatywnych metod izolacji)
2.Część praktyczna
  Izolacja RNA z tkanek
  Przygotowanie zdenaturowanego RNA
  Elektroforeza w żelu denaturującym
  Interpretacja wyników
6
Odwrotna transkrypcja
1.Podstawy teoretyczne (omówienie metody)
2.Część praktyczna
  Odwrotna transkrypcja z random hexamers
  Sprawdzanie jakości cDNA: PCR na obecność mRNA genu kontrolnego, elektroforeza
  Interpretacja wyników
6
Analiza DNA
1.Podstawy teoretyczne (omówienie rodzajów i zasad działania enzymów restrykcyjnych, zasada przygotowywania mapy restrykcyjnej, omówienie metody)
2.Część praktyczna
  Przygotowanie szalek LB-agaroza z Ampicyliną
  Transformacja bakterii plazmidowym
  Mini-hodowle płynne
  Izolacja DNA z bakterii (miniprepy)
  Mapa restrykcyjna, analiza restrykcyjn,
  Elektroforeza w żelu agarozowym
  Interpretacja wyników
12
Klonowanie
1.Podstawy teoretyczne (restrykcja, defosforylacja wektora, fosforylacja nieufosforylowanego DNA, klonowanie produktów PCR)
2.Część praktyczna
  Izolacja DNA z żelu agarozowego
  Ligacja, transformacja, mini-hodowla, izolacja DNA, analiza restrykcyjna
  Interpretacja wyników
12
PCR
1.Podstawy teoretyczne (zwykły PCR, reverse-transcription PCR, real-time PCR, projektowanie starterów)
2.Część praktyczna
  Zwykły PCR (namnażanie genu z genomowego DNA)
  Analiza restrykcyjna
  Elektroforeza w żelu agarozowym
  Interpretacja wyników
7
Izolacja genomowego DNA z jądrzastych komórek krwi
1.Podstawy teoretyczne (omówienie metody)
2.Część praktyczna
6
Analiza polimorfizmów metodą RFLP
1.Podstawy teoretyczne (omówienie metody, zaplanowanie schematu działania dla konkretnego polimorfizmu)
2.Część praktyczna
  Restrykcja DNA
  Elektroforeza w żelu agarozowym
  Interpretacja wyników
6
Analiza białek
1.Podstawy teoretyczne (zasady postępowania z białkami, omówienie metody)
2.Część praktyczna
  Przygotowanie żelu poliakryloamidowego, przygotowanie prób
  Elektroforeza
  Transfer, wybarwianie czerwienią Pounceau
  Immunoblot (reakcje z przeciwciałami), wywoływanie metodą chemiluminescencyjną
  Interpretacja wyników
12
Badania epigenetyczne: metylacja genomowego DNA
1.Podstawy teoretyczne (epigenetyka, omówienie metody z uwzględnieniem skutków modyfikacji chemicznej DNA)
2.Część praktyczna
  Modyfikacja DNA genomowego
  Amplifikacja badanego fragmentu
  Żel, izolacja
  Interpretacja wyników sekwencjonowania
12
Badania epigenetyczne: modyfikacja białek chromatyny, immunoprecypitacja chromatyny OD 2009 ROKU
1.Podstawy teoretyczne (rodzaje modyfikacji histonów, ich skutki dla aktywności genów, omówienie metody ChiP)
2.Część praktyczna
  Utrwalanie struktury chromatyny
  ChiP
  PCR
  Elektroforeza agarozowa
  Interpretacja wyników
16
RAZEM 103



Szkolenie odbywa się w Pracowni Naukowej Zakładu Endokrynologii
ul. Banacha 1a 02-097 Warszawa.
Kierownik szkolenia dr hab. Monika Puzianowska-Kuźnicka
tel. 0-22 5693-810 lub 0-22 5991-755
e-mail: monika@amwaw.edu.pl

powrót